单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗体阳性动物群特男人、寡核苷酸淡化成本费用高额或运作环节多样化。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯先生组织在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低生产成本、跨种群、全app平台兼容的全新解决方案。

期刊论文详细介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由中国内地国家内地生态学制品体师范技术学院基因隐性基因规律与生长发育生态学制品体学探究方案所和中国内地国家内地基因隐性基因规律能够主办人的国际性学术界交流杂志杂志，专业专注于有关报道生命图片生态学制品体学和医药学基因隐性基因规律学域的原創性探究方案成绩。JGG 202四年度影响到指数公式7.1，Scopus学术界交流杂志杂志评论公式CiteScore 9.9，位居JCR 202四年度GENETICS & HEREDITY域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY域Q1区，位居中国内地国家内地生态学制品体师范技术学院杂志杂志磁盘分区生态学制品体学商品类别1区(Top杂志杂志)，基因隐性基因规律学和什么是生化与大分子生态学制品体学小类双1区。

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什么东西是HEATag

比较巧妙的“二一体”设计的

HEATag是由凝集素和HUH内切酶构造的相结合蛋白质

「手机定位器」功能模块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化绘制（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「联接器」输出模块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）字段方形码实现共价连到。

“1+1>2”的体验：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样表标记符号与追溯。

Fig1: HEATag多沉标识关键技术展示图

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实操考察

HEATag算是有多用打？

还可以在不同于條件下，建立喂乳家禽上皮癌细胞系单上皮癌细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。探讨项目团队为 HEATag 设备了多轮 “压力值测试仪”，从上皮癌细胞系到上皮癌细胞质，从室温到超高温，从新鲜样板到固定不动样板，全方法手机验证它的比较稳判定和可靠的性。

首先轮测试软件对应母乳喂奶家禽上皮神经肿瘤细胞系：研发相关人员选购了基人、鼠、仓鼠5个种类的四大上皮神经肿瘤细胞（HEK293T、K562、MEF、CHO），在环境温度使用 HEATag 标记符号后分层测序。终于回报的 11447 个上皮神经肿瘤细胞中，85.66% 都能实现 HEATag 方形码最准自动匹配到原种类，范例间是交叉污染源非常少，UMAP 聚类剖析法剖析这是真接证明怎么写，HEATag 方形码与种类特女性朋友什么是基因组特点极高同一。 继续，测试图片经济必备要求进步骤升級：调查工作员来尝试在 4℃下标志新的度細胞、在温度下标志甲醇统一細胞，而且直接的标志細胞核。数据依旧会完美：各个经济必备要求下，样例标出与种群信心均极具比较好的涉及到的性，分割更准率超 95%。若果甲醇统一会造成 少少的转录本交叉点被污染的，細胞核光催化原理老有极富 RNA 流动，細胞分类的引用数据依旧会与新的度样例始终维持相同，声明书 HEATag 都可以标志各种正确处理经济必备要求下的实验报告样例。

Fig2: HEATag 可在有所差异经济条件下实现单細胞转录组混样分享

要符号喂乳家禽和浮游生物无脊椎神经家禽的原代细胞核

假若说癌细胞核系测式是 “基础框架题”，那团队范本可是 “追加题”， 以上范本恰恰恰因癌细胞核品类更复杂、环境均衡性性特殊化，拥有箭头技术工艺的 “困惑”，而 HEATag 恰恰恰在以上 “困惑” 上表现了胜机。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸策划 ，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不止能被准确的判别，任何主耍神经元类型的的聚类分析数据都清晰可见可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋资源海洋生物的兼容性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长形码与鱼类转录组有较高相同性性，不发现因高盐室内环境诱发的 “符号报废”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可建立喂奶软体动物聚集模板各种方面 scRNA-seq 讲解

Fig4: HEATag可推动鲜新浅海无脊椎骨食草动物丰富 scRNA-seq 定量分析

HEATag与组织细胞的紧密联系不容易产生转录组的同质性发生变化

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在来完成标记图片主线任务的同样，不懂对前因后果的转录类物质析构成串扰，做到了研究分析数据文件的完美性。

Fig5: HEATag就不会作用样版的 RNA 理解状态

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未来的可期

HEATag 能为单组织细胞的研究提供之类？

HEATag 的商业价值，远不只是于 “应对标记图片的问题”，它的协调性性和共通性，尚未为单组织科学研究打开文档其他或者性

从利用情境来了解

HEATag 能覆盖率从 “轻松会比较了解”（如癌组建与正确组建、治疗药物加工与比对）到 “大建设规模性理论论述”（如组建血神经细胞图谱制图、高通骁龙量筛分）的全範圍各种需求。跟着 PIP-seq、Stereo-cell 等新款可映射工艺的经济发展，HEATag 还能进的一步提高单血神经细胞理论论述的通量，注力科学研究公司发展大建设规模性的建设项目。

从跨层面实力来谈

HEATag 不只使中用转录组学，还能与表观表观遗传组学、核营养素组学、办公空间组学等水平切合，可通过定做指数和寡核苷酸字段，HEATag 可更快渗透有差异 的组学步奏，不直接影响数据信息抓取淬硬层。同样，因为HEATag还可的发展单组织细胞糖组学探索水平。

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合作的动态图

拜谱生物技术与陈凯专家确立进行初步协作相关

需要喜爱的是，在 HEATag 的工艺设备突显出极大的应该用实力的背景图片下，拜谱生物技术工程学已与南边海上小学科学与市政工程江苏试验室（苏州）陈凯专家教授确定系统化配合项目合作。男女双方预计着力 HEATag 的工艺设备的领域化正式出台、教学科学流量转化等大方向生成宽度协同合作，积极推动这类低总成本、跨种群的单血肿瘤神经细胞标志的工艺设备最快应该用于其实教学科学场合，为更好的试验室给予快速、第三产业的单血肿瘤神经细胞研究分析软件工具，力助教学科学工作任务者在血肿瘤神经细胞生物技术工程学学、海上生物技术工程学学、的疾病体制等领域拿得更好的进阶