肉的宰后嫩化主要是归因于肌原钎维机构的破环，肌原钎维机构是由内源性球蛋清电离影响酶挥发肌原钎维和癌内部膜骨架球蛋清造的。与十几年来时不时是注意的点的钙球蛋清酶不一样，胱天球蛋清酶（caspases）近几天拥有感关注话题。胱天球蛋清酶在癌内部膜凋亡的履行关键期起着至关主要的程度，其中的caspase-3在人死后球蛋清电离影响中的程度是一定要多方位面和复杂性的，这样指的进三步的论述。S-亚硝基化实现都可以转换器钙施放、电量基础代谢、球蛋清质挥发和癌内部膜凋亡来都可以转换器肉嫩，还有嫩度和持水程度。中后期的论述挖掘S-亚硝基化都可以降低根据线粒体的caspase-3级联影响，这可以是腹肌癌内部膜凋亡和羊肉产品转变的根本原因。caspase-3的的论述要点是其与癌内部膜凋亡的感情，其实，比较少有的论述讨论S-亚硝基化都可以转换器caspase-3的制度。

2024年9月由长沙草业读书张万刚副教授团队协作在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱动物为该研究提供了亚硝基化绘制组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

汉语一级标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202几年影响力因素：5.7

发过日子：2024年9月

顾客政府部门：南京农业大学

深入分析的材料：蛋白

拜谱可以提供技能：亚硝基化修饰组学

枝术路线地图：

一、探究毕竟

01.Caspase-3灵活性

现如今尚不模糊NO对caspase-3的克定制用能不归因于NO介导的S-亚硝基化，不相同氧化还原电位等度的GSNO算作外源性NO现货供应，以分析caspase-3的离体S-亚硝基化。最后发现，与都没有GSNO的组相对于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3抗逆性酶类同质性拉低（图1），与此前简讯一样的。GSNO整理拉低caspase-3抗逆性酶类的意向原故仍亟待系统阐述。

图1 有差异 质量浓度的GSNO处置对caspase-3可溶性的导致

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化的情况

论述方案Caspase-3的亚硝基化度，以表示GSNO对Caspase-3的表现性。经GSNO正确处理后，论文检侧到caspase-3核蛋白S-亚硝基化密度多（图2）。这么多但是表示，外源性GSNO培养出来可成就 引发caspase-3的离体S-亚硝基化。从未有过惊愕的是，在也没有GSNO现实存在的比对组中论文检侧到两个较弱的S-亚硝基化带，这表示caspase-3或者突发内源性的S-亚硝基化。既使，本论述方案中caspase-3的S-亚硝基化度较高，而caspase-3的渗透性削减，这与之间的论述方案相一致。既使，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化绘制位点尚不清晰，还必须 拓宽渠道一个脚印的不断探索。

图2 GSNO进行处理对caspase-3S-亚硝基化平行的影响到

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。黑色箭头的队列觉得S-亚硝基化肽，红颜色箭头的C觉得S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3光降解结蛋白酶

结血清身为一个为重要性的内部核骨架血清，在持续性肌内部核空间的结构的空间的结构全面性和收敛性等方面起着为重要性用处，探讨S-亚硝基化caspase-3对结血清可分解的特别敏理想化兼有为重要性含义。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的起始肌棉纤维棉血清）组相比之下，0 μM GSNO组（肌原棉纤维棉和caspase-3的孵育，无GSNO）的全面结血清含氧量为显著较低，信息提示caspase-3对结血清兼有隐藏的血清油脂水解力。在GSNO孵育后，全面结血清的含氧量突出多（P < 0.05）。还有就是，当GSNO渗透压偏高时，全面结血清的含氧量持续性调涨（P < 0.05）（图5）。一项反映出反映出，SNO修饰语的caspase-3以平行依赖性的办法压制结血清的可分解。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结蛋白质

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3光降解肌钙蛋清-T

肌钙核蛋清质-T (TnT)是原肌球核蛋清质的的调节负责任肌肉组织收宿的细细的的须要肌原黏胶弹性仟维核蛋清质。TnT的光化学挥发表现形式是检查到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化标准下，caspase-3对TnT的光化学挥发状态如下图如图所示6如图所示，与Std组（中含caspase-3和GSNO的肌原黏胶弹性仟维）对比，caspase-3组中30 kDa TnT精彩段落可观增多，体现了caspase-3积极参与了TnT的光化学挥发，还有就是，caspase-3与GSNO的孵育引起30 kDa TnT回落。在100和200 μM GSNO组之中无检查到很深的的差异(P > 0.05)，而当GSNO的有机废气浓度提升400 μM 时，该精彩段落可观增多(P < 0.05)。他们感觉体现了了SNO淡化的caspase-3对TnT光化学挥发的的调节使用。结核蛋清质和TnT是caspase-3的皮肤敏感底物，而GSNO处里降底caspase-3的灵活性酶类也许 引起肌原黏胶弹性仟维核蛋清质光化学挥发状态降底。以上说明，NO诱骗的S-亚硝基化还可以可以通过淡化半胱氨酸残基来的的调节caspase-3的灵活性酶类，接着进一次导致其对结核蛋清质和TnT的核蛋清质溶解的能力，然而导致牛肉片产品品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结ppt

本刍议然后刍议S-亚硝基化对caspase-3表达的后果极其很快对鸡肉片肌原氯纶身体之外吸附的后果。球血清质S-亚硝基化能否表达caspase-3的半胱氨酸残基，然后造成 caspase-3活力减小，进这一步缓和了其对鸡肉片肌原氯纶球血清质的球血清质油脂水解特性。

三、拜谱工作小结

探析选取了酶活法测定，亚硝基化遮盖组学具体分析，WB等在线检测方法，显示淀粉酶S-亚硝基化也可以遮盖caspase-3的半胱氨酸残基，这造成了caspase-3灵活性的下降，相结步遏制了其对羊肉肌原弹性纤维淀粉酶的淀粉酶淀粉酶质水解实力。本探析为释意淀粉酶质亚硝基化对口感的调节作用考核机制作为没事个新的第三视角。

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参考价值资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663